TD INFORMATIQUE - REGRESSI

Déterminer avec REGRESSI la vitesse initiale d’une réaction enzymatique.

Pour déterminer la vitesse initiale d’une réaction enzymatique, on a réalisé l’expérience suivante :

Introduire dans une série de tubes à hémolyse :

- tampon glycine-Mg²⁺ pH 9,8 1 mL

- substrat PNPP 5 mM 1 mL

- eau désionisée 1 mL

Equilibrer 5 min à 30°C

Au temps 0, ajouter rapidement

- solution d’enzyme PAL 0,1 mL

Au temps t, arrêter la réaction par addition de

- NaOH 0,04 M 5 mL

Lire l’absorbance à 405 nm contre un blanc.

On a obtenu les résultats expérimentaux suivants :

t (min)	0	0,5	1	2	3	4	5	10	15	20	25	30	45	60	75	90
A405	0	0,013	0,123	0,362	0,62	0,868	1,074	2,046	2,622	2,7	2,789	2,838	2,88	2,902	2,92	2,94

Soit e, le coefficient d’extinction molaire du PNP.

Définir une nouvelle variable C (concentration en µM), calculée à partir de la valeur d’absorbance des tubes ; puis une variable n (nombre de moles de produit libérées par tube).

1. La vitesse de la réaction au temps t étant définie comme étant la pente de la tangente à la courbe n=f(t) en ce point, déterminer le plus précisément possible la valeur de la vitesse initiale (en µmol/min).

2. Ramener la valeur de cette vitesse à 1 mL d’enzyme (µmol/min/mL d’enzyme).

Modélisation de Michaëlis – Menten

On cherche à déterminer les paramètres cinétiques d’une réaction enzymatique.

Les vitesses initiales d’une réaction enzymatique en fonction de concentrations variables en substrat sont données dans le tableau suivant :

Concentration en S en mmol/L	Vi en µmol/min/L d’enzyme
125	33
180	42
247	49
402	62
798	78

En supposant que la représentation Vi=f(S) puisse être modélisée par l’équation suivante :

1. Déterminer la valeur de Vmax et K_M.

2. Calculer la valeur de Vi pour une concentration en substrat S = 2.K_M.