Présentation TP MICROBIOLOGIQUE

Objectifs

L’enseignement de la microbiologie a pour objectifs essentiels :

ü de comprendre les implications des microorganismes au cœur du secteur professionnel concerné, que ces microorganismes interviennent dans la fabrication de bioproduits ou qu’ils en soient les contaminants ;

ü de comprendre les méthodologies des analyses et contrôles pratiqués sur les chaînes de fabrication et sur les bioproduits ;

ü de connaître et de justifier les règles d’hygiène mises en œuvre dans les bio-industries.

Première année : Identification des différents genres bactériens

Deuxième année : Dénombrement bactérien

1- Identification des différents genres bactériens (première année).

è Quelques exemples d’observation microscopiques de grams :

è Les milieux permettant de déterminer les différentes caractéristiques des bactéries :

è Exemple de fiche milieu et exploitation des résultats :

2- Dénombrement et antibiogramme (deuxième année)

è Préparation de la gamme de dilution

è Dénombrement en milieu solide

è Dénombrement en milieu liquide

è Antibiogrammes

L’antibiogramme standard en milieu gélosé : méthode des disques

Pour réaliser l’antibiogramme par la méthode des disques, la culture bactérienne est ensemencée à la surface d’une gélose spécialement étudiée. Des disques pré-imprégnés d’une dose connue d’antibiotique sont déposés à la surface de la gélose. L’antibiotique diffuse à partir du disque en créant un gradient de concentration. La détermination du diamètre de la zone d’inhibition permet une estimation de la concentration minimale inhibitrice. Les caractères de sensibilité ou de résistance de la souche bactérienne en seront déduits.

En pratique, on réalise à partir de l’isolement (souche pure) un ensemencement en tapis sur le milieu. On dispose ensuite les disques d’antibiotiques et on place à l’incubateur. Au bout de 24 h, on lit les différents diamètres d’inhibition et on peut conclure en comparant ceux-ci aux abaques de lecture.

è Les résultats

Les abaques de lecture se présentent sous forme de bandes présentant deux données qui délimite les zones SENSIBLE, INTERMEDIAIRE et RESISTANTE. Un report du diamètre mesuré sur la boîte permet de conclure rapidement.

Exemple : 3 souches bactériennes sont testées vis à vis de l’ampicilline. On mesure les diamètres d’inhibition suivants : souche A 8 mm, souche B 25 mm et souche C 15 mm

La souche A est donc RESISTANTE, la souche B SENSIBLE et la souche C est déclarée INTERMEDIAIRE.

è Compétences nécessaires :

ü Rigoureux

ü Organisé

ü Appliqué

ü Conscient des potentiels dangers

ü Esprit d’équipe

ü Autonome

ü Efficace

Moreno Océane – Lericheux Anaïs

Promo 2016/2018 Lycée de la plaine de l’Ain